細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對細(xì)胞造成損害,。MVE液氮罐

　　一、 實驗前準(zhǔn)備：

　　1,、將水浴鍋預(yù)熱至37℃

　　2,、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

　　3,、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管、培養(yǎng)瓶等等,。

　　二,、取出凍存管：

　　1、根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號,。

　　2,、從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞,，同時核對管外的編號,。

　　三、迅速解凍：

　　1,、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化,。

　　2,、約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內(nèi),。

　　四、平衡離心：

　　用架盤天平平衡后,，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min

　　五,、制備細(xì)胞懸液：

　　1,、吸棄上清液。

　　2,、向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,，吹打制成細(xì)胞懸液。

　　六,、細(xì)胞計數(shù)：

　　細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜,。

　　七、培養(yǎng)細(xì)胞：

　　將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),，將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),，換液的時間由細(xì)胞情況而定。

　　初學(xué)者易犯錯誤：

　　1,、水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃,。

　　2、水浴鍋內(nèi)凍存管太多,，導(dǎo)致傳熱不佳,，使融化時間延長。

　　3,、離心前忘記平衡,，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。

　　4,、一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染,。MVE液氮罐