細胞凍存是細胞生存的重要要領(lǐng)之一,，使用凍存技能將細胞置于-196℃液氮中低溫生存，可以使細胞臨時離開生長狀態(tài)而將其細胞特性生存起來,，如許在必要的時間再蘇醒細胞用于實行。并且適度地生存肯定量的細胞,，可以防備因正在造就的細胞被污染或其他不測變亂而使細胞丟種,，起到了細胞保種的作用。查特液氮罐

除此之外,，還可以使用細胞凍存的情勢來購置,、寄贈、互換和運送某些細胞,。 細胞凍存時向造就基中參加掩護劑——終濃度5%~15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點低落，加之在遲鈍凍結(jié)條件下,，細胞內(nèi)水分透出,，淘汰了冰晶形成，從而制止細胞毀傷,。尺度冷凍速率開始為-1 到 -2℃/min,，當(dāng)溫度低于-25℃時可加快，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。

現(xiàn)在常用的掩護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,，它們對細胞無毒性，分子量小,，溶解度大,，易穿透細胞。

使用材料

儀器：液氮罐,、凍存管(塑料螺口專用凍存管或安瓿瓶),、離心管,、吸管、離心機等

試劑：0.25%胰酶,、造就基,、含掩護劑的造就基(即凍存液)

附：凍存液配制：造就基參加甘油或DSMO，使其終濃度達5-20%,。掩護劑的種類和用量視差別細胞而差別,。配好后4℃下生存。

操作步聚

1.消化細胞,，將細胞懸液網(wǎng)絡(luò)至離心管中,。

2.1000rpm離心10分鐘，棄上清液,。

3.沉淀加含掩護液的造就,，計數(shù)，調(diào)解至5106/ml左右,。

4.將懸液分至凍存管中,，每管1ml。

5.將凍存管口封嚴(yán),。如用安瓿瓶則火焰封口,，封口肯定要嚴(yán)，不然蘇醒時易出現(xiàn)爆裂,。

6.貼上標(biāo)簽,，寫明細胞種類，凍存日期,。凍存管外拴一金屬重物和一細繩,。

7.按下列次序降溫：室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。

注意：操縱時應(yīng)警惕,，以免液氮凍傷,。液氮定期查抄，隨時增補,，絕對不克不及揮發(fā)潔凈,，一樣通常30立升的液氮能用1～1.5月。查特液氮罐